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科研實驗無小事——細胞的STR鑒定
發布時間: 2021-09-29 點擊次數: 1995次做實驗的時候才發現細胞的種類太多,于是我們需要查詢各種文獻看每個細胞的特征,從而設計實驗規劃與步驟,我們在緊湊的實驗種完成了實驗,提交文章的時候,才發現,需要細胞鑒定。
據統計約30%細胞系被交叉污染或錯誤辨識,因使用了交叉污染或錯誤辨識的細胞而導致研究結論錯誤、結果不可重復、臨床細胞治療災難性后果……這浪費大量時間、精力和金錢。因此NIH、ATCC等機構多次發出呼吁,要求研究者對細胞進行鑒定,最近美媒報道1/6科學家在研究使用“假"細胞,2014年12月、2015年2月Science雜志分別發表文章專題闡述細胞交叉污染和錯誤辨識的嚴重性;2015年4月Nature通知:Nature旗下所有雜志將要求作者鑒定論文中所用細胞系;2015年6月即有報道稱一科學家因用錯細胞系,撤銷Nature論文。NIH、ATCC、Nature和Science等機構對此多次發出呼吁,要求研究者對細胞進行鑒定,STR基因分型已被作為金標準應用于細胞系鑒定,越來越多雜志開始要求投稿人提供細胞STR鑒定結果。
在2011年美國就已經頒布了細胞STR鑒定國家標準(ANSI/ATCC ASN-0002-2011)。目前STR檢測已被廣泛應用于親子鑒定、個體識別、細胞來源判定等方面。ATCC、DSMZ、JCRB等國際有名細胞庫已將STR基因分型列為細胞鑒定的金標準。
STR鑒定已經成為了細胞株的“ID"能在科研界通行無阻,必須要有STR。那么動物源呢,因為建立的DNA條帶并不完善,目前只有小鼠的部分細胞可以提供STR。
STR鑒定描述:
利用熒光標記擴增產物長度多態分析方法對細胞樣本進行9個/16個STR位點進行分型。設計PCR引物,組成2個PANEL用于擴增多態位點。位點的熒光標記采用引物上標記5’FAM熒光標記。引物用在線Primer3 軟件設計。PCR產物稀釋后取少量與內標標記混勻后直接上ABI 3130xl進行毛細管電泳,數據文件用GeneMapper4.0(Appliedbiosystems)來分析。
STR(Short Tandem Repeat,短串聯重復序列)是一類廣泛存在于真核生物基因組中的DNA串聯重復序列,由于其核心序列重復次數存在個體差異多態性,因此STR也被稱為細胞的DNA指紋。
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