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    葉綠體被膜完整性的測(cè)定

    發(fā)布時(shí)間： 2023-01-16　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1065次

    原理

    由于玻璃氰-化-鉀不能透過(guò)被膜，故完整葉綠體在等滲介質(zhì)中不能進(jìn)行玻璃氰-化-鉀光還原的Hill反應(yīng)。而失去完整被膜的葉綠體，鐵氰-化-鉀可以進(jìn)入類囊體進(jìn)行Hill反應(yīng)。根據(jù)這一原理，比較脹破與未脹破的葉綠體Hill反應(yīng)速率，就可計(jì)算葉綠體被膜的完整度。

    材料與儀器

    植物材料
    鐵氰-化-鉀 NH4Cl
    氧電極測(cè)氧全套裝置 燒杯 微量進(jìn)樣器 洗耳球

    步驟

    1. 取0.1ml葉綠體提取液加到0.9ml的蒸餾水中并攪拌1min，使葉綠體被膜脹破，加1ml測(cè)定介質(zhì)Ⅰ懸浮備用。


    2. 取0.1ml未脹破葉綠體提取液加入反應(yīng)杯中，視反應(yīng)杯體積加入測(cè)定介質(zhì)Ⅱ，加入適量鐵氰-化-鉀和NH4Cl，使鐵氰-化-鉀和NH4Cl的最終濃度都為1mmol/L。攪拌，平衡1min，照光測(cè)定Hill反應(yīng)放氧速率，記錄5min，然后清洗反應(yīng)杯。


    3. 將已脹破葉綠體加入反應(yīng)杯中，再加入適量測(cè)定介質(zhì)Ⅱ、鐵氰-化-鉀和NH4Cl，使反應(yīng)體系物質(zhì)最終濃度同未脹破葉綠體測(cè)定體系，測(cè)定過(guò)程同2。


    4. 分別計(jì)算脹破和未脹破的葉綠體測(cè)定體系中單位時(shí)間的放氧量（或Hill反應(yīng)速率）。


    5. 計(jì)算被膜完整度。

    注意事項(xiàng)

    1. 本實(shí)驗(yàn)所用玻璃要存放在冰箱中，存放時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，最好現(xiàn)配現(xiàn)用。


    2. 葉綠體的分離要在0~4℃下進(jìn)行，玻璃器皿和溶液都須預(yù)冷，操作要快，整個(gè)分離過(guò)程最好在5min內(nèi)完成。


    3. 離心過(guò)程中離心機(jī)的轉(zhuǎn)速不宜過(guò)高，否則葉綠體中的淀粉粒會(huì)打破葉綠體被膜。


    4. 被膜完整度的測(cè)定過(guò)程中，反應(yīng)杯內(nèi)破碎葉綠體與完整葉綠體的葉綠素含量應(yīng)相等。

    常見(jiàn)問(wèn)題

    葉綠體的外膜和內(nèi)膜合稱為被膜。葉綠體的外膜和內(nèi)膜都是連續(xù)的單位膜, 每層膜的厚度為6～8nm, 內(nèi)外兩膜間有10～20nm寬的間隙, 稱為膜間隙。與線粒體不同的是，葉綠體的內(nèi)膜并不向內(nèi)折成嵴, 但在某些植物中，內(nèi)膜可皺折形成相互連接的泡狀或管狀結(jié)構(gòu)，稱為周質(zhì)網(wǎng)(peripheral reticulum)，這種結(jié)構(gòu)的形成可增加內(nèi)膜的表面積。


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